口蹄疫A型抗(kang)體檢(jian)測試劑盒（酶聯免疫法）
使(shi)用說明書(shu)
【產品名(ming)稱(cheng)】
通用名：口蹄疫A型抗體檢測試劑盒（酶(mei)聯免(mian)疫法）
英文名：Test Kit for Antibodies to Foot and Mouth Disease Virus A（ELISA）
【包裝規格】×2/盒96T×1/盒、96T、96T×5/盒
【預期用途】 口蹄疫是由口蹄疫病毒（Foot and Mouth Disease Virus，FMDV）引(yin)起(qi)的(de)偶蹄動物的(de)一(yi)種急性、熱性、高度接(jie)觸性傳染病(bing)，其特征(zheng)為口腔黏膜、蹄部(bu)、乳房皮膚發生水泡(pao)和爛斑。
本試劑(ji)用(yong)于(yu)檢(jian)測(ce)牛(niu)、羊、豬(zhu)血清(qing)中(zhong)口蹄疫A型(xing)抗體，可(ke)用于口蹄疫A型疫苗(miao)免(mian)疫效果評價。
【原 理(li)】
本試劑盒由預包被口蹄疫A型抗體(ti)的酶標板、抗體工作液、抗原液、酶標記物及其他配套試劑組成，應用阻斷酶聯免疫法（ELISA）原理檢測牛、羊、豬血清樣本中口蹄疫A型抗體。實驗時將稀釋的樣本與抗原液同時加入酶標板中孵育，樣本中的抗體與酶標板上的抗體競爭抗原，阻斷抗原與板的結合；經洗滌后，再加抗體工作液孵育；經洗滌后加入酶標記物孵育；再經洗滌除去未結合的酶標記物，在孔中加底物液，與酶標結合物反應形成藍色產物，顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成負相關；加入終止液終止反應后，產物變為黃色；用酶標儀在450nm波長(chang)測定各反應孔中的吸光值，即可知樣品是否含有(you)口蹄疫A型抗體。
【試(shi)劑盒組成】
序號 | 名稱 | 規格/96T×1 | 規格/96T×2 | 規格/96T×5 |
1 | 酶標記物(wu) | 6ml×1(紅蓋(gai)) | 11ml×1(紅蓋(gai)) | 26ml×1(紅蓋(gai)) |
2 | 抗體工作液 | 6ml×1(藍蓋) | 11ml×1(藍蓋) | 26ml×1(藍蓋) |
3 | 抗原(yuan)液 | 6ml×1(黑蓋(gai)) | 11ml×1(黑蓋(gai)) | 26ml×1(黑蓋) |
4 | 20X濃(nong)縮洗滌液(ye) | 40ml×1(白(bai)蓋) | 40ml×2(白蓋) | 200ml×1(白蓋) |
5 | 底物液A | 6ml×1(白蓋) | 11ml×1(白蓋) | 26ml×1(白蓋) |
6 | 底物液B | 6ml×1(黑蓋) | 11ml×1(棕蓋) | 26ml×1(黑蓋) |
7 | 終止液 | 6ml×1(黃蓋) | 11ml×1(黃蓋) | 26ml×1(黃蓋) |
8 | 陽性對照 | 1.0 ml×1(紅蓋) | 1.5 ml×1(紅蓋) | 2.0 ml×1(紅蓋) |
9 | 陰性對照 | 1.0 ml×1(綠蓋) | 1.5 ml×1(綠蓋) | 2.0 ml×1(綠蓋) |
10 | 酶標板 | 96T×1 | 96T×2 | 96T×5 |
11 | 蓋(gai)板(ban)膜 | 1 | 2 | 5 |
12 | 自封袋 | 1 | 1 | 2 |
13 | 說明書 | 1 | 1 | 1 |
14 | 稀(xi)釋板(ban) | 1 | 2 | 5 |
【儲存及(ji)有效(xiao)期】 2～8℃保(bao)存(cun)，有(you)效期(qi)12個月(yue)。
包被板開封后請于2～8℃避(bi)光保存，避(bi)免受潮。使用期(qi)限為2個月(yue)。
【適用(yong)儀器】 含450nm、630nm波長(chang)的(de)酶標儀，37℃恒溫設備，可調微量移液器。
【樣(yang)品(pin)準備】
1.取動物全血按常規方法制(zhi)備(bei)血清(qing)，要求血清(qing)清(qing)亮(liang)，無(wu)溶血、無(wu)污染。樣品1周(zhou)內可于(yu)2～8℃保存，長期需置-20℃保存。
2.用(yong)工作洗(xi)滌液將(jiang)待(dai)檢牛、羊(yang)先按(an)32倍稀釋（如5μl血清加入(ru)155μl工作洗滌液中，混勻），待檢豬血清按16倍稀(xi)釋（如5μl血清加入75μl洗(xi)滌液中，混勻），陰(yin)、陽性對照(zhao)不用稀釋。
3.濃縮(suo)洗(xi)滌液(ye)使(shi)用前應(ying)恢復(fu)至室溫(wen)使(shi)沉(chen)淀溶解，然后用蒸餾(liu)水或(huo)去離子水作20倍稀釋成工作洗(xi)滌(di)液(如19份(fen)蒸餾(liu)水或去(qu)離子水+1份濃縮洗(xi)滌液)。
【檢驗方法(fa)】
1.使用前將試劑盒(he)置室溫30分(fen)鐘，恢復至(zhi)室溫。
2.取所需用量酶標(biao)板條，設陰(yin)性/陽性對(dui)照(zhao)各(ge)2孔，未用(yong)的板(ban)條盡(jin)快密封，2～8℃保(bao)存。
3.陰、陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao)孔分別加入陰、陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao)50μl，樣(yang)品(pin)孔每孔先加入(ru)工作洗滌(di)液25ul，再加入(ru)稀釋后的樣品25μl；最后都加入(ru)抗原液50μl。
注：加入抗原后牛、羊樣本稀釋比例相當于1:128，豬樣本稀釋比例(li)相(xiang)當于1:64。
4.震蕩混(hun)勻(yun)10秒，蓋(gai)好蓋(gai)板膜，置37℃（推(tui)薦水浴）避光(guang)反應(ying)30分鐘。
5.甩去孔(kong)內(nei)液體(ti)，每孔(kong)加350μl工作(zuo)洗(xi)滌液，靜置30秒(miao)后(hou)棄去，重復洗滌5次，最(zui)后一次拍干。
6.每孔加抗(kang)體(ti)工作液50μl，蓋好蓋板(ban)膜，置37℃避光(guang)反應(ying)30分鐘。
7.洗滌，同步(bu)驟5。
8.每孔加酶標記(ji)物50μl，蓋好蓋板膜，置37℃避光反應30分鐘。
9.洗滌，同步驟5。
10.每孔依(yi)次加底物液A、底(di)物液B各50μl，混(hun)勻，蓋好蓋板膜，置37℃避光反應15分鐘。
11.每孔加終止液(ye)50μl，混(hun)勻(yun)，于450nm(可(ke)用630nm作參比波長）測定(ding)各孔吸光(guang)值（A值）。
【參考值】 實驗正常的情況下，陰性對照A值(zhi)≥1.0，陽性(xing)對照A值≤陰性(xing)對照A值×50%。
【檢(jian)驗結果的解(jie)釋(shi)】
1.PI（阻斷率(lv)）=（1- 陰性對照平均A值）×100%，PI≥50%為陽(yang)性；PI＜50%為陰性。
2.本(ben)實驗檢測牛(niu)、羊血(xue)清結果為陽性(xing)時(shi)表明(ming)待檢(jian)樣本中含有口蹄疫A型抗(kang)體，且效(xiao)價高于1:128，達到保護水平；反之檢測結果為陰(yin)性時表(biao)明待檢樣本(ben)中不含有口蹄疫A型抗體，或效價低于1:128，未(wei)達到(dao)充足保(bao)護水平。
3.本實驗檢測(ce)豬血(xue)清結果為陽(yang)性(xing)時表明待檢樣本中含有(you)口蹄疫A型抗體，且效價高于1:64，達到保護水平；反之檢測結果為(wei)陰性時表明待檢樣本中(zhong)不(bu)含有口蹄疫A型抗體，或效價低于1:64，未達到(dao)充足保護水平。
4.如需了解樣本抗(kang)體的最終效價，可(ke)將(jiang)樣本進(jin)行(xing)梯度稀釋(shi)，使PI≥50%的最(zui)高稀釋比例即為(wei)該樣本抗體的最終效價。
【試驗方法的局限性】
該(gai)試驗(yan)僅作為定性(xing)牛、羊(yang)、豬(zhu)血清中口蹄疫A型(xing)抗體，根據PI值(zhi)高低(di)可作(zuo)抗體水平(ping)強、中(zhong)、弱的粗略評(ping)估。
該試劑盒(he)不(bu)適(shi)用于合成肽疫(yi)(yi)苗免疫(yi)(yi)抗體效價評估
