人胰(yi)島素(INS)酶(mei)聯免疫(yi)吸附測定(ding)試劑盒使用說明書

實驗原理(li) ：

本試(shi)劑盒采用雙(shuang)抗體夾心法酶聯免疫吸附試(shi)驗 (ELISA) 。往預先包被有人胰島素(INS) 捕獲抗體(ti)的微孔(kong)中(zhong)， 依(yi)次加(jia)入(ru)樣本、標準品、生物素標記的檢測抗體，HRP 酶結合物，中間經過溫(wen)育和洗(xi)滌，用底物 TMB 顯(xian)色，TMB 在(zai)過氧化物酶(HRP)的(de)催(cui)化(hua)下轉化(hua)成(cheng)藍色，并在酸的(de)作(zuo)用下轉化(hua)成(cheng)最終的(de)黃(huang)色。顏色的(de)深淺和樣品(pin)中的(de)人(ren)胰島素  (INS) 呈(cheng)正相關(guan)。用酶標儀(yi)在 450nm 波長下測定吸光度 (OD 值) ，計算樣品濃度。

操作步驟 ：

1.  從室溫平衡 10 分鐘后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.  加樣：分別將樣品或不同濃度標準品按(an)照(zhao) 100 μ l 每孔(kong)(kong)(kong)加入(ru)相應孔(kong)(kong)(kong)中，空白孔(kong)(kong)(kong)加入(ru) 100μL 通用稀(xi)釋液。蓋 上封板膜(mo)后 37℃溫育 1 小時。  (建(jian)議：將待測樣本用通用稀(xi)釋液稀釋 1 倍后(hou)再加入酶標(biao)板內測試。從(cong) 而減少基(ji)質效應對(dui)測試(shi)結(jie)果的(de)誤差影響，最后(hou)計算樣(yang)本濃度時需乘以對(dui)應的(de)稀釋倍(bei)數。所有的(de)待測樣(yang)本和 標準品在檢測中(zhong)建議設(she)立(li)復孔) 。

3.  加生物素化(hua)抗體(ti)：取出酶標板，棄去液(ye)體(ti)，不用洗滌。每孔直接加入生物素化(hua)抗體(ti)工(gong)作液(ye) 100 μL，蓋上封 板膜后 37℃溫育 1 小時。

4.  洗板：棄去液體，每孔加入 300 μL 1x 洗滌液(ye)，靜置(zhi) 1 分鐘，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板

3 次 (也可(ke)用洗(xi)板機洗(xi)板) 。

5.  加酶結合物工(gong)作液：每孔加入酶結合物工作液 100 μL，蓋上封板膜后 37℃溫育 30 分鐘。

6.  洗板：棄去液體(ti)按(an)步驟(zou) 4 洗滌方法，洗板 5 次。

7.  加底物：每孔加入(ru)底物(TMB)90 μL，蓋上(shang)封板膜，37℃避光溫育 15 分鐘。

8.  加終止液：取(qu)出(chu)酶標板(ban)，每孔直接加入終止液 50 μL，立即在 450nm 波(bo)長(chang)處測(ce)定各(ge)孔的OD 值(zhi)。

結果判斷：

1.  計算標準品和(he)樣本復孔的平均(jun) OD 值(zhi)并減(jian)去空白(bai)孔的OD 值作為(wei)校(xiao)正值。以濃度為(wei)橫坐標，OD 值為縱(zong)坐標， 在(zai)雙對(dui)數(shu)坐(zuo)標(biao)紙(zhi)上繪出四參數(shu)邏(luo)輯(ji)函數(shu)的標(biao)準曲線(作圖時去掉空白組的值)。

2.  若樣品OD 值高(gao)于標準曲(qu)線上(shang)限(xian)，應(ying)(ying)適當(dang)稀釋(shi)后重測并在計算樣本濃度(du)時(shi)乘以(yi)相應(ying)(ying)的稀釋(shi)倍數。

典型數據(ju)和參(can)考曲線：

以下數據和曲(qu)線僅供參考，實驗者需根(gen)據自己的實驗建立標準曲(qu)線。

試(shi)劑盒性(xing)能 ：

1.  重復性(xing)：板(ban)內(nei)變異系(xi)數(shu)(shu)小于(yu) 10%，板(ban)間變異系(xi)數(shu)(shu)小于(yu) 10%。

2.  回收率(lv)：在選取的(de)健康人血清、血漿和(he)組織勻漿中加入 3 個不同濃度水平的人 INS，計算回(hui)收率

3.  線(xian)性稀(xi)釋：分(fen)別(bie)在選取的(de) 4 份健康人血清、血漿和組織勻漿中加入高濃度人 INS，在標準曲線動力學范圍

內進(jin)行稀釋，評(ping)估線(xian)性。評(ping)估線(xian)性。

本(ben)試劑(ji)盒(he)只能用于科(ke)學研(yan)究，不得用于醫學診斷          6

注意事項：

1.  嚴格按照規(gui)定(ding)的時間和溫度進行溫育以(yi)保證準確結果。所有試(shi)劑都必須(xu)在使用(yong)前(qian)達到室溫 20-25℃ 。使用

后立即(ji)冷(leng)藏保存(cun)試(shi)劑。

2.  洗板(ban)不(bu)正確可以(yi)導(dao)致不(bu)準確的結果。在加入底物(wu)前確保盡量吸干(gan)孔內(nei)液(ye)體(ti)。溫育過程中不(bu)要讓微(wei)孔干(gan)燥掉。

3.  消除板底殘留的液體和手指(zhi)印，否(fou)則影響OD 值。

4.  底(di)物顯(xian)色液應呈無色或很(hen)淺的顏色，已經變藍的底(di)物液不能(neng)使用。

5.  避免試劑(ji)和標本的交(jiao)叉污(wu)染(ran)以免造成錯誤(wu)結果(guo)。

6.  在儲存(cun)和溫育時避免強(qiang)光直接(jie)照射(she)。

7.  平衡至室溫(wen)后再打開密封袋以防(fang)水滴凝聚(ju)在(zai)冷板條上。

8.  任何反(fan)應(ying)試劑(ji)不(bu)能接觸(chu)漂(piao)白(bai)溶(rong)劑(ji)或漂(piao)白(bai)溶(rong)劑(ji)所散發的強(qiang)烈(lie)氣體。任何漂(piao)白(bai)成分都會破壞(huai)試劑(ji)盒中(zhong)反(fan)應(ying)試劑(ji)

的生物活性。

9.  不能使用過期產品。

10. 如果可能(neng)傳播疾病，所有的樣品(pin)(pin)都應管(guan)理好，按照規定的程序處(chu)理樣品(pin)(pin)和檢測裝(zhuang)置。