1、血清：操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血紅細胞迅速小心地分離。
2、血漿：EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
3、細胞上清液：1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4、組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液。
5、保存：如(ru)果(guo)(guo)樣(yang)品不(bu)立(li)即使用(yong)，應(ying)將其(qi)分成小部分-70℃保存，避免反復(fu)冷凍(dong)。盡(jin)可能的不(bu)要(yao)使用(yong)溶血(xue)或(huo)高(gao)血(xue)脂血(xue)。如(ru)果(guo)(guo)血(xue)清中大量顆(ke)粒，檢(jian)測前先離(li)心或(huo)過濾(lv)。不(bu)要(yao)在(zai)37℃或(huo)更(geng)高(gao)的溫度加熱(re)解(jie)凍(dong)。應(ying)在(zai)室溫下(xia)解(jie)凍(dong)并(bing)確保樣(yang)品均勻地充分解(jie)凍(dong)。

 實驗原理
用純(chun)化(hua)的(de)抗(kang)(kang)體(ti)包被(bei)微孔(kong)板，制成固相(xiang)載體(ti)，往(wang)包被(bei)抗(kang)(kang)C3抗(kang)(kang)體(ti)的(de)微孔(kong)中依次加入(ru)標(biao)本或標(biao)準品(pin)(pin)、生物(wu)素(su)化(hua)的(de)抗(kang)(kang)C3抗(kang)(kang)體(ti)、HRP標(biao)記的(de)親和(he)素(su)，經過*洗滌后用底物(wu)TMB顯色(se)(se)。TMB在過氧化(hua)物(wu)酶(mei)的(de)催(cui)化(hua)下(xia)轉化(hua)成藍色(se)(se)，并(bing)在酸(suan)的(de)作用下(xia)轉化(hua)成z終的(de)黃色(se)(se)。顏色(se)(se)的(de)深淺和(he)樣(yang)品(pin)(pin)中的(de)C3呈正(zheng)相(xiang)關。用酶(mei)標(biao)儀在450nm波(bo)長下(xia)測(ce)定吸(xi)光度(du)(du)(OD值)，計算樣(yang)品(pin)(pin)濃度(du)(du)。

標本的采集及保存
1. 血清：全血標本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
2. 血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標本采集后30分鐘內于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
3. 細胞培養物上清或其它生物標本：請1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
4. 樣本處理：血清或血漿標本推薦稀釋10,000倍。
注(zhu)：以(yi)上標(biao)本(ben)置4℃保存應小(xiao)于(yu)1周，-20℃或(huo)-80℃均(jun)應密封保存，-20℃不(bu)(bu)應超過(guo)1個(ge)月，-80℃不(bu)(bu)應超過(guo)2個(ge)月；標(biao)本(ben)溶(rong)血會影響檢測結果，因此溶(rong)血標(biao)本(ben)不(bu)(bu)宜進(jin)行此項檢測。

操作技巧：
A、加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
B、合理安排檢測量，以免反應板過多造成洗板等待時間長。
C、吸取液體時，要用量程和需要量接近的槍去吸，減少誤差。
D、要盡量做雙孔實驗，這樣才既能保證數據的準確性，又能反映出試劑盒的精密度。
E、樣(yang)品稀釋液應用加液器加注(zhu)，并經常(chang)校對(dui)其準確性。