豬乳酸脫氫酶ELISA試劑盒操作程序

樣本處理及要求

1.  血清：將收集于血清分離管的全血標本在室溫放置2小時或4℃過夜，然后1000×g離心20 分鐘，取上清即可，或將上清置于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
2.  血漿：用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標本，并將標本在采集后的30分鐘內于2-8℃ 1000×g離心15分鐘，取上清即可檢測，或將上清置于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
3.  組織勻漿：用預冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結果），稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應體積的PBS（一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣品對應9mL的PBS，具體體積可根據實驗需要適當調整，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞，可以對勻漿液進行超聲破碎，或反復凍融。*后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘，取上清檢測。

4.  細胞培養物上清或其它生物標本：請1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將上清置于-20℃或-80℃保存，但應避免(mian)反(fan)復(fu)凍融。

豬乳酸脫氫酶ELISA試劑盒操作程序

需要而未提供的試劑和器材

1. 酶標儀（450nm）

2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒溫箱

4. 蒸餾水或去離子水

實驗結果計算

以所測標準品的OD值為橫坐標，標準品的濃度值為縱坐標，在坐標紙上或用相關軟件繪制標準曲線，并得到直線回歸方程，將樣品的OD值代入方程，計算出樣品的濃度。

1. 試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用，酶標(biao)包被板開封后如未用完(wan)，板條應裝入(ru)密封袋中保存。

2. 濃洗滌液可能會有結(jie)晶析出，稀釋時可在水浴(yu)中加溫助溶，洗滌時不影響(xiang)結(jie)果。

3. 各步加(jia)樣均應使(shi)(shi)用加(jia)樣器，并經(jing)常(chang)校對(dui)其準確性，以避免(mian)試驗(yan)誤差。一次加(jia)樣時間(jian)控制在5 分鐘內(nei)，如(ru)標本數量多(duo)，推(tui)薦(jian)使(shi)(shi)用排槍加(jia)樣。

4. 請每次測定的同時做標準曲線，建議做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本OD 值大于標準品孔di一孔的OD 值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n 倍）后再測定，計算時請z后乘以總稀釋倍數（×n×5）。

5. 封板膜只限一次性使用，以避免交叉(cha)污染。

6. 底物請避光保存。

7. 嚴格按照說明書的操作進(jin)行，試驗結果判定必須以酶(mei)標儀讀數為(wei)準.

8. 所有樣品，洗滌(di)液和各種廢(fei)棄物都應(ying)按(an)傳染物處理(li)。

9. 本試劑不同批(pi)號(hao)組分不得混(hun)用(yong)。

10. 試劑盒2-8℃冷(leng)藏(zang)，保(bao)質期6個月(yue)