大鼠鈣調素依賴性蛋白激酶1α(CAMK-1α)ELISA試劑盒僅供研究使用

大(da)鼠(shu)鈣調素依賴(lai)性蛋白激酶(mei)1α(CAMK-1α)ELISA試劑盒實驗目的

本(ben)試劑盒用于體外定量(liang)(liang)檢(jian)測血清(qing)、血漿、組織、細胞上清(qing)及相關液體樣(yang)本(ben)中大(da)鼠鈣調(diao)素依(yi)賴性蛋白激酶1α（CAMK-1α）的含量(liang)(liang)。

有效期：6個月

保存條件：2-8℃

實驗原理

試劑(ji)盒(he)采用雙抗體(ti)一步夾心法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。往預(yu)先(xian)包被大(da)鼠(shu)鈣調(diao)(diao)素依賴性(xing)蛋白激(ji)酶1α（CAMK-1α）捕獲(huo)抗體(ti)的(de)(de)包被微孔中(zhong)(zhong)，依次加入標(biao)本、標(biao)準品、HRP標(biao)記的(de)(de)檢測(ce)抗體(ti)，經過(guo)溫育(yu)并(bing)(bing)*洗(xi)滌(di)。用底(di)物TMB顯色(se)，TMB在(zai)過(guo)氧(yang)化(hua)物酶的(de)(de)催(cui)化(hua)下轉化(hua)成藍色(se)，并(bing)(bing)在(zai)酸的(de)(de)作(zuo)用下轉化(hua)成zui終的(de)(de)黃色(se)。顏(yan)色(se)的(de)(de)深淺(qian)和樣(yang)品中(zhong)(zhong)的(de)(de)大(da)鼠(shu)鈣調(diao)(diao)素依賴性(xing)蛋白激(ji)酶1α（CAMK-1α）呈正相關(guan)。用酶標(biao)儀(yi)在(zai)450nm 波長(chang)下測(ce)定吸光度（OD 值），計(ji)算樣(yang)品濃度。

大鼠(shu)鈣調素依賴性(xing)蛋白激(ji)酶1α(CAMK-1α)ELISA試劑盒(he)組成

備注：

1. 標準品濃(nong)度依(yi)次(ci)為：48、24、12、6、3、0 U/L

2. 經過大(da)量正(zheng)常標本(ben)檢驗，標本(ben)的(de)正(zheng)常濃度值(zhi)均在試劑(ji)盒(he)提供的(de)檢測(ce)范圍內，實驗過程中(zhong)直接取50μL樣本(ben)上樣即可(ke)。當有部分樣本(ben)值(zhi)超過zui大(da)標準品(pin)濃度時，可(ke)用樣本(ben)稀(xi)(xi)釋液(ye)將標本(ben)進行(xing)(xing)適(shi)當稀(xi)(xi)釋后(hou)再進行(xing)(xing)實驗。

樣本處理(li)及要求

1. 血(xue)清(qing)：全血(xue)標本請于(yu)(yu)室溫放置2小(xiao)時(shi)或4℃過夜后(hou)于(yu)(yu)1000g離心20分鐘，取上清(qing)即可檢測，或將(jiang)標本放于(yu)(yu)-20℃或-80℃保存，但應避(bi)免(mian)反復凍融(rong)。

2. 血漿：可用(yong)EDTA或肝(gan)素作為抗(kang)凝劑，標(biao)(biao)本采集(ji)后30分鐘內于(yu)2 - 8°C 1000g離心(xin)20分鐘，或將標(biao)(biao)本放于(yu)-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。

3. 細胞培養物上清或(huo)其它生(sheng)物標(biao)本：1000g離心20分鐘，取上清即可檢測，或(huo)將標(biao)本放于-20℃或(huo)-80℃保存(cun)，但應避免反復凍融。

注：標本溶血會影響zui后檢測結果(guo)，因(yin)此(ci)溶血標本不宜進行此(ci)項(xiang)檢測。

需(xu)要而未提供的試劑和(he)器材

1. 酶標儀(yi)（450nm）

2. 高精度加樣(yang)器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒溫箱

4. 蒸餾(liu)水(shui)或去離子水(shui)

試劑準備

試劑盒從冷(leng)藏(zang)環(huan)境(jing)中(zhong)取出應在室(shi)溫(wen)平衡后方可使用。

20×洗滌緩(huan)(huan)沖液(ye)的稀釋：蒸餾(liu)水按1：20稀釋，即1份(fen)20×洗滌緩(huan)(huan)沖液(ye)加(jia)19份(fen)蒸餾(liu)水。

操(cao)作步驟

1. 從室溫平衡(heng)20min后(hou)的(de)鋁(lv)箔(bo)袋中取出所需板(ban)條，剩余板(ban)條用自封袋密封放回4℃。

2. 設置(zhi)標(biao)準(zhun)品孔(kong)和樣本孔(kong)，標(biao)準(zhun)品孔(kong)各(ge)加不(bu)同(tong)濃度的標(biao)準(zhun)品50μL；

3. 樣本孔中加入待測(ce)樣本50μL；空白孔不加。

4. 除(chu)空白孔(kong)外(wai)，標準品孔(kong)和(he)樣本孔(kong)中每孔(kong)加入辣根過氧(yang)化物酶(mei)（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住(zhu)反應孔(kong)，37℃水浴鍋或恒(heng)溫(wen)箱溫(wen)育(yu)60min。

5. 棄去(qu)液體，吸(xi)水紙(zhi)上(shang)拍(pai)干(gan)，每孔加(jia)滿洗(xi)滌液（350μL），靜置(zhi)1min，甩去(qu)洗(xi)滌液，吸(xi)水紙(zhi)上(shang)拍(pai)干(gan)，如此重(zhong)復(fu)洗(xi)板5次（也可用洗(xi)板機洗(xi)板）。

6. 每(mei)孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7. 每(mei)孔加入終止液(ye)50μL，15min內，在(zai)450nm波長處測定各孔的OD值。

注(zhu)意事項

1. 嚴格按照規定的(de)時間和溫(wen)度進行(xing)溫(wen)育以保證(zheng)準確結果。所有(you)試劑都必須(xu)在使用前達到室溫(wen)20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。

2. 洗板不(bu)正(zheng)確(que)(que)可以導致不(bu)準確(que)(que)的結(jie)果。在加入底物(wu)前確(que)(que)保盡量吸干孔內液體。溫育過程中不(bu)要讓微孔干燥掉。

3. 消(xiao)除板底殘留的(de)液體和手指印，否則影響OD值。

4. 底物顯色液應呈無色或很淺(qian)的顏色，已經變(bian)藍的底物液不能使(shi)用。

5. 避免試劑和標本的(de)交(jiao)叉污(wu)染以免造成(cheng)錯誤結果。

6. 在儲存和(he)溫(wen)育時(shi)避免(mian)強光直接(jie)照射。

7. 平衡至室(shi)溫后(hou)再打開(kai)密(mi)封袋以防(fang)水滴凝聚在冷(leng)板條(tiao)上。

8. 任何(he)反應(ying)試(shi)劑(ji)不能接觸漂白(bai)溶劑(ji)或漂白(bai)溶劑(ji)所(suo)散(san)發的強烈氣體(ti)。任何(he)漂白(bai)成分都會破壞試(shi)劑(ji)盒中反應(ying)試(shi)劑(ji)的生物(wu)活性。

9. 不能使(shi)用(yong)過期(qi)產(chan)品。

10. 如果可能傳播疾病，所有的樣品(pin)都應管理(li)好(hao)，按照規定的程序處理(li)樣品(pin)和檢測裝置。

洗板(ban)方法

手工洗板方法：吸去（不可觸及板壁(bi)）或甩掉(diao)酶標(biao)板內的液(ye)體；在實驗臺上(shang)鋪(pu)墊(dian)幾(ji)層吸水紙，酶標(biao)板朝(chao)下用力拍幾(ji)次；將30（48T的20倍(bei)）倍(bei)濃縮洗滌液(ye)用蒸餾水30（48T的20倍(bei)）倍(bei)稀釋后備用。根據需要，重(zhong)復(fu)此過程數次。

自(zi)動洗板：如果(guo)有自(zi)動洗板機，應在熟練使用(yong)后(hou)再用(yong)到正式實(shi)驗(yan)過(guo)程中。

實(shi)驗(yan)結果計算

以所測標(biao)(biao)準(zhun)品(pin)的(de)OD值(zhi)為橫坐標(biao)(biao)，標(biao)(biao)準(zhun)品(pin)的(de)濃度(du)值(zhi)為縱(zong)坐標(biao)(biao)，在坐標(biao)(biao)紙(zhi)上或用相關(guan)軟件(jian)繪(hui)制標(biao)(biao)準(zhun)曲線，并得(de)到直(zhi)線回(hui)歸方(fang)程(cheng)，將樣品(pin)的(de)OD值(zhi)代入(ru)方(fang)程(cheng)，計算出樣品(pin)的(de)濃度(du)。

（此圖僅供參考）

大鼠鈣(gai)調素依賴性蛋白(bai)激(ji)酶1α(CAMK-1α)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)性能(neng)

1. 檢測范圍：1.5 U/L – 48 U/L。

2. 靈敏度(du)：zui低檢測濃度(du)小于0.1 U/L。

3. 特(te)異性：不與其(qi)它可溶性結構類似物交(jiao)叉反應。

4. 重復性：板(ban)(ban)內變異(yi)系數小于(yu)10% ，板(ban)(ban)間變異(yi)系數小于(yu)15% 。